重复接种 COVID-19 疫苗可促进肾移植接受者的记忆 T 细胞和 B 细胞反应：一项多中心随机对照试验的结果

背景

了解 COVID-19 疫苗接种后的细胞免疫反应对于优化肾移植接受者 (KTR) 的加强计划至关重要。

方法

一项多中心随机对照试验 (NCT05030974) 的免疫学子研究探讨了KTR患者在接种2剂或3剂信使RNA (mRNA) 疫苗后血清学应答较差时，不同重复接种策略的效果。我们通过酶联免疫吸附斑点 (ELISpot) 试验和血清IgG抗体水平比较了SARS-CoV-2特异性白介素-21记忆T细胞和B细胞应答。患者随机分配接受以下治疗：单剂量mRNA-1273（100 μg，n = 25）、双剂量mRNA-1273（2 × 100 μg，n = 25）或单剂量编码SARS-CoV-2刺突糖蛋白的26型腺病毒 (Ad26.COV2.S)（n = 25）。同时，我们还研究了50例接受100 μg mRNA-1273疫苗接种的KTR患者的反应，这些患者被随机分配继续接种霉酚酸酯/霉酚酸（n = 25）或停止接种霉酚酸酯/霉酚酸（n = 25）。作为参考，我们将数据与接受过两次mRNA-1273初次疫苗接种的KTR患者进行了比较。

结果

重复接种疫苗使所有患者的血清转化率从21%提高到66%，这与SARS-CoV-2特异性白细胞介素-21记忆T细胞（比值比，3.84 [1.89-7.78]；P  < 0.001）和B细胞（比值比，35.93 [6.94-186.04]；P  < 0.001）水平的增强密切相关。不同疫苗接种策略的这些反应没有显著差异。与接种 2 次原发疫苗的 KTR 相比，抗原特异性记忆 B 细胞的数量在重复接种疫苗后表现出对血清转化进行分类的潜力（曲线下面积为 0.64；95% 置信区间为 0.37-0.90；P  = 0.26 和曲线下面积为 0.95；置信区间为 0.87-0.97；P  < 0.0001）。

结论

我们的研究强调了病毒特异性记忆 T 细胞和 B 细胞反应对于全面了解 KTR 中 COVID-19 疫苗有效性的重要性。

SARS-CoV-2特异性IL-21记忆T细胞应答

使用市售的IL-21酶联免疫吸附斑点(ELISpot)，按照制造商的指南(荷兰乌得勒支U-CyTech biosciences公司)，在基线和重复接种后28天测量SARS-CoV-2特异性IL-21记忆T细胞应答。8^检测由同一技术人员在同一实验室进行。简而言之，使用Ficoll Paque(荷兰埃因霍温GE Healthcare公司)从肝素化血液中分离PBMC，并将其储存在-140°C下直至分析。将解冻的PBMC加入预先包被有IL-21捕获抗体的96孔聚偏氟乙烯板(300 000 PBMC/孔)中。随后，用SARS-CoV-2抗原刺激这些细胞44小时，使用S1和S2肽池（JPT肽技术公司，柏林，德国）的组合，该肽池由15肽组成，具有11个氨基酸重叠，包含整个S1。使用生物素化的检测抗体、链霉亲和素-辣根过氧化物酶和3-氨基-9-乙基咔唑检测产生IL-21的T细胞。最后，使用ELISpot读数仪（Bioreader 6000-V；Bio-Sys，卡尔本，德国）对斑点进行计数。IL-21记忆T细胞应答表示为每100万（10 ⁶）PBMC中SARS-CoV-2特异性产生IL-21的记忆T细胞（斑点）的数量。该反应的检测下限 (LLoD) 为每 10 ^{6 个}PBMCs 3.3 个 IL-21 点。

SARS-CoV-2特异性记忆B细胞反应

使用市售的 B 细胞 ELISpot 按照制造商 (U-CyTech biosciences) 提供的说明，在基线和重复接种疫苗后 28 天测量 SARS-CoV-2 特异性记忆 B 细胞应答。8^检测由同一技术人员在同一实验室进行。将解冻的 PBMC 引入 24 孔板（2 000 000 PBMC/孔），并通过与 IL-2 和 R848 预孵育 7 天进行多克隆激活。随后，将细胞（SARS-CoV-2 抗原特异性细胞 100 000 个细胞和总 IgG 产生细胞 10 000 个细胞）置于预涂有 IgG 捕获抗体的 96 孔聚偏氟乙烯板中，培养 20 小时。加入生物素化的检测抗体，包括用于估算总IgG产生细胞数的IgG生物素和用于估算SARS-CoV-2抗原特异性IgG产生细胞数的重组SARS-CoV-2 Spike His-tag生物素蛋白。随后，使用辣根过氧化物酶和3-氨基-9-乙基咔唑进行染色，并使用酶联免疫斑点仪（Bioreader 6000-V；Bio-Sys）计数斑点。记忆性B细胞应答被量化为每100万（10 ^{6 ）个PBMC中SARS-CoV-2抗原特异性IgG产生细胞（斑点）的数量。该应答的LLoD为每10 6 个}PBMC中有10个B细胞斑点。